潔凈區(qū)潔凈等級劃分為：
級：指高風險操作區(qū)，如：灌裝、放置膠塞桶、敞口安瓿瓶、敞口西林瓶的區(qū)域及無菌裝配或連接操作的區(qū)域。通常用層流操作臺(罩)來維持該區(qū)的環(huán)境狀態(tài)。
B級：指無菌配制和灌裝等高風險操作區(qū)所處的背景區(qū)域。
C級和D級：指生產(chǎn)無菌藥品過程中重要程度較次的潔凈操作區(qū)。
此外還有一些諸如CNC， 百級、千級、之類的概念，這里不做展開討論。
目錄
一溫濕度
二靜壓差
三噪音
四照度
五沉降菌
六浮游菌
一、溫濕度
標準規(guī)定：潔凈區(qū)的溫度和相對濕度與藥品生產(chǎn)工藝要求相適應(yīng)。無特殊要求時，潔凈區(qū)溫度為18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%。有特殊要求車間根據(jù)工藝控制。
溫度觀察：檢查溫濕度計是否完整，視線正對溫濕度計水平讀取顯示的數(shù)據(jù)，需要記錄的應(yīng)立即填入表格中。
濕度觀察：視線正對濕度表，準確讀數(shù)。需記錄的應(yīng)立即填入表格中。
需要加水的濕度計，在觀察前應(yīng)檢查在蓄水腔內(nèi)是否有水，無水則需加入適量水，再觀察濕度。
潔凈區(qū)的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。
設(shè)備計量人員每年至少組織校驗一次監(jiān)控系統(tǒng)的儀器設(shè)備。
二、靜壓差
標準規(guī)定：潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間、不同等級潔凈區(qū)之間的壓差應(yīng)不低于10帕斯卡，相同潔凈度等級不同功能的操作間之間應(yīng)保持2-3帕的壓差梯度，以防止污染和交叉污染。
產(chǎn)塵房間與相鄰房間呈相對負壓。
潔凈區(qū)的靜壓差以微壓差計顯示，每日至少記錄兩次，上午一次，下午一次。(包括潔凈區(qū)與室外，不同潔凈級別間及所有有壓測試時所有的空調(diào)系統(tǒng)和層流系統(tǒng)應(yīng)處于連續(xù)的正常運行狀態(tài)。
潔凈室所有的門應(yīng)關(guān)閉，測試時不允許有人穿越房間。
當發(fā)現(xiàn)監(jiān)測結(jié)果超出標準規(guī)定的范圍時，應(yīng)立即檢查原因，必要時對空調(diào)系統(tǒng)進行調(diào)整。
三、噪音
標準規(guī)定：潔凈區(qū)噪音不得高于70分貝。
潔凈區(qū)的噪音檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等變更的時候應(yīng)在變更結(jié)束后重新檢測噪音。
檢測方法:檢測點布置，當面積≤50m2時，僅測房間中心一個點；當房間面積較大時，每增加50m2增加一個點，測點距在1.2m。
四、照度
標準規(guī)定：潔凈區(qū)主要操作間照度不得少于300勒克斯，一般照明的照度均勻度不應(yīng)小于0.7。
潔凈區(qū)的照度檢查每年不得少于一次，在經(jīng)過設(shè)備大修、廠房改造、工藝布局調(diào)整等變更的時候應(yīng)在變更結(jié)束后重新檢測照度。
檢測要求：室內(nèi)照度測度必須在室溫已趨穩(wěn)定，光源光輸出趨于穩(wěn)定后進行(對熒光燈必須有100h)。
檢測方法:測點平面離地面0.85m，按間距1-2m布點，測點距墻面1m。其要求基本與潔凈度的測定位置要求相同。記錄實測照度值并計算總的平均照度。
照度測量一般僅測定除局部照明之外的一般照明。
五、沉降菌
5.1 方法概述
本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。
5.2 使用的儀器和設(shè)備
高壓消毒鍋：使用時應(yīng)嚴格按照操作規(guī)程進行。
恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。
培養(yǎng)皿:一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使用前將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20min。
培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2～8℃的環(huán)境中存放。
5.3 測試步驟
采樣：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預(yù)先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5h，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。
培養(yǎng):在30～35℃培養(yǎng)，時間為5天。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。
菌落計數(shù)：用肉眼直接計數(shù)，然后用5～10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。
5.4 測試狀態(tài)
沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)的溫濕度須達到規(guī)定的要求，靜壓差必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
沉降菌測試前，被測試潔凈區(qū)已經(jīng)過消毒。
測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。
5.5 測試人員
測試人員必須穿戴符合環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2個人。
5.6 測試時間
對單向流，如級凈化房間內(nèi)及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10分鐘后開始。對非單向流，如B級、C級、D級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30分鐘開始。
5.7 沉降菌采樣點
采樣點數(shù)目及其布置：最少采樣點數(shù)目：沉降菌的最少采樣點數(shù)可按表1確定。在滿足最少測點數(shù)的同時，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。
表1最少采樣點數(shù)目
表2最少培養(yǎng)皿數(shù)
5.8 采樣點的布置
工作區(qū)測試點位置離地0.8～1.5m左右(略高于工作面)?？稍陉P(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點，采樣點的布置應(yīng)力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中，某局部區(qū)域過于稀疏。
5.9 結(jié)果計算
用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。
平均菌落數(shù)的計算見下式：
式中：m為平均菌落數(shù)；
m1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；
n為培養(yǎng)皿總數(shù)。
結(jié)果評定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。
潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評定標準。見表3。
若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新測試兩次，測試結(jié)果必須合格。
重新測試仍不合格，按“潔凈室環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程”進行超標調(diào)查。
5.10 注意事項
測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。
采取一切措施防止人為對樣本的污染。
對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。
由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別。
采樣前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
六、浮游菌
6.1 取樣前準備工作
依據(jù)檢測區(qū)域的取樣點數(shù)，按照《培養(yǎng)基配制、滅菌標準操作程序》制備適量的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。
在超凈工作臺內(nèi)，以無菌操作法將配制好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yǎng)基凝固后移出潔凈區(qū)。
將制備的營養(yǎng)瓊脂平皿倒置于隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時。取出逐個檢查，確認無菌落數(shù)后即可使用。
6.2 采樣
將上述制備好的營養(yǎng)瓊脂平皿交與Q人員取樣。
6.3 儀器、設(shè)備和培養(yǎng)基
浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿(φ90mm×15mm)、培養(yǎng)基(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)、恒溫培養(yǎng)箱
6.4 儀器、設(shè)備、培養(yǎng)基的要求
浮游菌采樣器必須要有流量計和定時器。應(yīng)嚴格按儀器說明書的要求進行操作。采樣器必須按儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性，檢驗項目有：定時器，轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速，流量計。每次測試前應(yīng)先接通電源，啟動真空抽氣泵，然后調(diào)節(jié)流量計和定時器?？諝獠蓸恿扛鶕?jù)需要選定，已知采樣器的流量(L/min),設(shè)定采樣時間(min)兩者相乘即得采樣量(L)。采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造，采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑，采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測定點的高度定，盡量減少彎曲。
6.5 測試方法
測試用儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。采樣器進入被測房間前先用消毒劑滅菌。用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂盤、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。采樣口及采樣管使用前必須高溫滅菌，如用消毒劑對采樣管的外壁、內(nèi)壁進行消毒，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒。
6.6 采樣程序
儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開動真空泵抽氣，使儀器的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并調(diào)好流量、轉(zhuǎn)盤轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣品縫隙高度。置采樣器于采樣點后，開啟采樣器、轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時間。
6.7 測試狀態(tài)
浮游菌測試前微生物限度檢查室已經(jīng)消毒過。測試狀態(tài)為靜態(tài)測試，并在報告中注明測試狀態(tài)。
6.8 測試人員
測試人員必須穿戴符和被測環(huán)境級別的工作服。靜態(tài)測試時，室內(nèi)人員不得多于2人。
6.9 測試時間
對單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于10min后開始。對非單向流，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于30min后開始。
最少采樣點數(shù)目及其布置，最小采樣量，見下表:
工作區(qū)測點位置離地0.8m～1.5m左右，送風口測點位置離開送風面30cm左右；可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加測點。每個采樣點一般采樣一次。對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上。布置采樣點時，至少應(yīng)離開塵粒較集中的回風口1m以上。采樣時，測試人員應(yīng)站在采樣口的下風側(cè)。
6.10 培養(yǎng)
取樣結(jié)束后將平皿復(fù)倒置隔水式恒溫水浴培養(yǎng)箱內(nèi)于30～35℃培養(yǎng)48小時。并以未采樣的營養(yǎng)瓊脂平皿作對照皿。
菌落計數(shù)：用肉眼直接計數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個或2個以上菌落重疊，可分辨時，仍以2個或2個以上的菌落計數(shù)。培養(yǎng)結(jié)束，將上述培養(yǎng)后的平皿取出，逐個點計菌落數(shù)，必要時用放大鏡檢查，并記錄。
6.11 結(jié)果計算
平均菌落數(shù)的計算見下式：
平均菌落數(shù)m=
式中：
m為該房間(或區(qū)域)的平均菌落數(shù)；
m1、m2‥‥‥mn為該房間(或區(qū)域)各取樣點的菌落數(shù)；
N為培養(yǎng)皿總數(shù)
記錄：測試報告中應(yīng)記錄房間溫度、相對濕度、壓差、測試狀態(tài)及測試數(shù)據(jù)。
更新時間：2023-12-04
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